INFLUÊNCIA DA CONCENTRAÇÃO PLASMÁTICA DO COLESTEROL HDL NO IMPLANTE DE EMBRIÕES DE VACAS RECEPTORAS

XXXXXXXXXXXXXXXX Aprovada como parte das exigências para a obtenção do Título de Mestre em XXXXXX pela Comissão Examinadora. Prof. Dr. INSERIR O NOME DO ORIENTADOR Orientador _____________________________________ Prof. Dr. Lote 1 (L1 = 29), (Fazenda Vitória, município de Alfenas – MG), lote 2 (L2 = 35) e lote 3 (L3 = 24), (Fazenda ZBR Limeira, município de Passos – MG), (Fazenda Santa Maria, município de Passos – MG), respectivamente. O diagnóstico de gestação foi realizado no dia 30 pela visualização da vesícula embrionária com ultrassom DP 2200vet (Mindray®). Foram retiradas amostras de sangue da veia coccígea, no momento da transferência dos embriões. O material foi centrifugado e os soros separados logo após a coleta foram enviados ao laboratório de análises clínicas Sertoli Medicina Laboratorial – Belo Horizonte, para mensuração de HDLc e P4.

O teor de HDLc não diferiu entre as vacas de prenhez positiva ou negativa. Blood samples were collected from the coccygeal vein at the time of transfer of the embryos, centrifuged and separated from the sera immediately after collection and sent to the Sertoli Medicina Laboratorial - Belo Horizonte clinical laboratory for the measurement of HDLc and P4. The HDLc content did not differ between positive and negative pregnant cows. As for the animal category, there was a negative correlation between HDLc, but the P4 concentration was similar. However, the gestation rate differed between the lots, being higher in lot 2 and 3 compared to lot 1 and the P4 concentration was higher in lot 3 with a higher gestation rate (62. compared to the others lots (45. Colesterol HDL 17 Referências Bibliográficas 20 CAPÍTULO 1 – INFLUÊNCIA DA CONCENTRAÇÃO PLASMÁTICA DO COLESTEROL HDL NO IMPLANTE DE EMBRIÕES DE VACAS RECEPTORAS 24 Abstract 25 Introdução 26 Materiais e Métodos 26 Localização, animais, transferência de embriões e diagnóstico de gestação 26 Dosagens de colesterol-HDL e progesterona 28 Análises estatísticas 28 Resultados 29 Discussão 31 Conclusões 32 Suporte Financiamento 32 Referências Bibliográficas 33 1 INTRODUÇÃO A pecuária brasileira passa por relevantes transformações devidoa grande concorrência e exigência tanto do mercado interno, quanto externo.

Tais fatores influenciaram o Brasil a se desenvolver, buscando avanços tecnológicos, superando assim sua produção e rentabilidade. Com isto, o país aposta em melhoramento genético com qualidade e rapidez. Segundo informações do Departamento de Agricultura dos Estados Unidos (United States Department of Agriculture - USDA), o Brasil deteve o segundo maior efetivo de bovinos, sendo responsável por 22,5% do rebanho mundial, atrás apenas da Índia. O país foi também o segundo maior produtor de carne bovina, participando com 16,3% da produção global. REVISÃO DE LITERATURA 2. Transferência de embrião e fatores que afetam a técnica A transferência de embrião (TE) é uma técnica biotecnológica aplicada aos rebanhos bovinos com o objetivo de melhoramento genético. A TE consiste em coletar embriões de uma fêmea doadora e transferi-los para fêmeas receptoras, as quais irão completar o período de gestação.

Esta técnica possibilita uma fêmea de superioridade genética produzir um número de descendentes maior ao que seria possível obter durante sua vida reprodutiva (Gonçalves et al. De acordo com Palhano (2008), com a TE, produzindo os embriões in vitro, é possível gerar aproximadamente 50 produtos por ano para cada doadora, sendo que fisiologicamente, nesse mesmo período, só seria possível obter um produto. A progesterona atua com frequência em sinergia com o estrógeno (E2), exercendo várias funções no crescimento das glândulas endometriais e lóbulo-alveolar da glândula mamária, na atividade secretora do oviduto e das glândulas endometriais para fornecimento de nutrientes para o desenvolvimento do zigoto antes da sua implantação, na inibição da contração uterina durante a gestação e na regulação da secreção de gonadotrofinas (Swenson; Reece, 1996).

De acordo com Binelli (2000), o ambiente uterino corretamente preparado pela P4 fornece as condições mais favoráveis para o desenvolvimento do concepto. A manutenção do embrião em bovinos ocorre após o reconhecimento materno da gestação. De acordo com Antoniazzi e colaboradores (2011), esse período requer o alongamento do embrião. Segundo Diskin e Morris (2008), concentrações altas de P4 circulante, imediatamente após a concepção, têm sido associadas ao alongamento do concepto juntamente ao aumento da produção de interferon-tau e maiores taxas de prenhez em vacas. Colesterol Colesterol é uma molécula que pertence ao grupo de esterois, que são compostos esteroides combinados com álcool (Figura 3). Segundo Scartezini e colaboradores (1997), o colesterol pode apresentar-se de duas formas, sendo elas a forma livre (forma funcional, componente estrutural das membranas celulares e na superfície da lipoproteína) ou esterificada (forma de armazenamento, encontrada no interior das células ou no interior das lipoproteínas).

Figura 3 – Estrutura molecular do colesterol. Fonte: Próprio autor. O colesterol, sendo uma molécula insolúvel em água e, consequentemente insolúvel no sangue, é transportado no mesmo através das lipoproteínas, que são sintetizadas no fígado e intestino, atuando no transporte de lipídeos (Figura 4). Relatos demonstram ainda que o aumento de colesterol possa elevar a taxa de gestação por reduzir o número de CLs subfuncionais, aumentando, assim, o período de vida dos CL funcionais nas fêmeas bovinas. Os autores sugeriram que este fenômeno poderia ser resultante do aumento das células da teca e da granulosa ocorrido antes da ovulação, o que levaria ao aumento da capacidade esteroidogênica (Ezzo; Hegazy, 1999). O colesterol é o substrato utilizado pelas células luteínicas para a produção de progesterona e, nos bovinos, a lipoproteína de alta densidade (HDL) é a principal fonte deste metabólito de acordo com Grummer e Carrol (1988), sendo a mais abundante no plasma folicular.

A concentração sérica de colesterol apresenta padrão cíclico, segundo Talavera e colaboradores (1985), com uma redução na fase luteínica, que de acordo com Christie e colaboradores (1979), deve-se ao fato de ser utilizada como substrato para a síntese de progesterona. Portanto, uma maior concentração de colesterol, levando a um aumento plasmático de progesterona pode ser benéfica para a fertilização e para a sobrevivência do embrião (Santos 1998; Funston, 2004). FL = fosfolípideos; apo = apoproteína; CL = colesterol; CE = colesterol esterificado; TG = triglicerideos. Nas células luteínicas, o colesterol é utilizado para a síntese de progesterona, e nos bovinos a lipoproteína de alta densidade (HDL) é a principal fonte desse metabólito. Para Hawkins e colaboradores (1995) e Williams (2001), as HDL parecem ser as únicas lipoproteínas com acesso ao compartimento intrafolicular.

Estas representam cerca de 80% da massa total de lipoproteínas no soro bovino, e foi demonstrado que tanto as HDL como as LDL regulam de forma diferenciada alguns aspectos do crescimento e do metabolismo das células da teca, da granulosa e luteais em bovinos. De acordo com Willians (2001), em células de bovinos a capacidade das HDL de estimular a produção de progesterona e androstenodiona é mais potente e, aparentemente, as LDL atenuam a produção de P4 estimulada pelas HDL. Função do interferon-tau durante o reconhecimento materno da gestação em ruminantes. Ciência Rural, v. n. p. Armstrong DG, Gong JG, Gardner JO, Baxter G, Hogg CO, Webb R.  Theriogenology, 42:1263-1274.   Binelli, M. Guzeloglu A. Badinga L. Arnold, D. Endogenous progesterone during luteal phase before insemination influences embryo recovery in lactating dairy cows.

J Anim Sci, v. p. Bruss, M. L. San Diego: Academic Press, 2008. p. Christie, M. H. Strauss, J. Tese (Doutorado em Zootecnia) - Universidade Federal de Viçosa, 1991.   Diskin, M. G. Morris, D. G. Anim. Sci, v. p. Ezzo OH, Hegazy MA. Effect of dietary fat on ovarian and metabolic response of heifers suffering from ovarian inactivity. f. Dissertação (Mestrado) – Departamento de Zootecnia, Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 1994. Funston RN. Fat supplementation and reproduction in beef females. J Anim Sci, v. Gonçalves, Paulo Bayard Dias, José Ricardo de Figueiredo, Vicente José de Figueirêdo Freitas. Biotécnicas aplicadas à reprodução animal. ed. São Paulo: Roca, 2008. González, F. A review of lipoprotein cholesterol metabolism: Importance to ovarian function.  J. Anim. Sci. Grummer, R. Carrol, D. J.

A review of lipoprotein cholesterol metabolism: Importance to ovarian function.  J. Anim. Anim. Sci. IETS. Statistics of Embryo Collection and Transfer in Domestic Farm Animals. Embryo Transfer Newsletter, v. Kaneko, J. J. Harvey, J. W. Bruss, M. th ed. Academic Press, San Diego. p.    Lammoglia MA, Bellows RA, Grings EE, Bergman JW, Bellows E, Short RE, Hallford DM, Randel RD. Effects of dietary fat and sire breed on puberty, weight, and reproductive traits of F1 beef heifers. R. Nelson, J. S. Schneider, H. J. Lamming, G. E. Effects of time of progesterone supplementation on embryo development and interferon – t production in the cow. Veterinary Journal, v. p. Reprodução em bovinosfisiopatologia, terapêutica, manejo e biotecnologia. ed. Rio de Janeiro: Editora LF Livros, 2008, p. Rader, D. J. Anais. Uberaba: ABCZ, 1998. p.

Scartezini, M. et al. J Dairy Sci, v. p. Spell AR, Beal WE, Corah LR, Lamb GC. Evaluating recipient and embryo factors that affect pregnancy rates of embryo transfer in beef cattle. Theriogenology, v. Swenson, M. J. Reece, W. O. Dukes. Anim. Sci. Wagtendonk-Deleeuw, A. M. Mulaart, E. Anais. Uberlândia: Conapec Jr; Botucatu: UNESP, 2001. p. CAPÍTULO 1 – INFLUÊNCIA DA CONCENTRAÇÃO PLASMÁTICA DO COLESTEROL HDL NO IMPLANTE DE EMBRIÕES DE VACAS RECEPTORAS ‘‘Influence of the plasmatic concentration of HDL cholesterol in the implant of recipient cow embryos’’ O presente artigo encontra-se de acordo com as normas da submissão exigidas pelo periódico Revista Brasileira de Zootecnia. qualis B1. com. br José Antônio Dias GarciaII jose. garcia@unifenas. br Afiliação dos Autores: IMestrando do Programa Reprodução, Sanidade e Bem-Estar Animal.

Universidade José do Rosário Vellano - UNIFENAS. Lot 1 (L1 = 29), (Fazenda Vitória, municipality of Alfenas - MG), lot 2 (L2 = 35) and lot 3 (L3 = 24), Fazenda ZBR Limeira, Maria, municipality of Passos - MG), respectively. The diagnosis of gestation was performed on day 30 by visualization of the embryonic vesicle with DP 2200vet ultrasound (Mindray®). Blood samples were collected from the coccygeal vein at the time of transfer of the embryos, centrifuged and separated from the sera immediately after collection and sent to the Sertoli Medicina Laboratorial - Belo Horizonte clinical laboratory for the measurement of HDLc and P4. The HDLc content did not differ between positive and negative pregnant cows. As for the animal category, there was a negative correlation between HDLc, but the P4 concentration was similar. A reprodução animal é um dos fatores mais importantes para a produtividade e, aliada às tecnologias, permite que o produtor multiplique e melhore o seu rebanho em uma velocidade elevada.

Entretanto, as técnicas de reprodução animal possuem alguns fatores que afetam negativamente o seu êxito, os quais têm sido alvo de diversos estudos. Assim, para se obter menores taxas de perdas embrionárias e, consequentemente, reduzir a perda financeira do produtor, é necessário melhorar a eficiência reprodutiva nas vacas receptoras, diminuindo o estresse oxidativo e melhorando a resposta imune, o que resulta em um aumento da receptividade embrionária. Portanto, avaliar as concentrações plasmáticas de HDLc nas receptoras de embriões é de grande importância para a seleção da receptora e, além disso, pode contribuir para o aumento das taxas de prenhez. Neste sentido, o presente estudo se ocupou de mensurar os níveis séricos de HDLc e P4 de vacas receptoras de embriões, avaliando a correlação existente entre tais níveis e a taxa de gestação das mesmas.

Não foram utilizadas neste estudo receptoras que não apresentaram tecido luteal ou um CL com pelo menos 13 mm, ou estiveram fora do padrão desejado e/ou apresentaram algum problema clínico que as tornassem inaptas para a TE. Os embriões foram mantidos a 37oC em equipamento próprio para o transporte até o momento da transferência (transferidos a fresco). Foi analisado também o escore de condição corporal (ECC) das receptoras com uma avaliação numa escala de 1 a 5, onde 1 é muito magra e 5 muito gorda, entrando no programa apenas animais com classificações de 2 a 4. Após a seleção das receptoras, as mesmas foram submetidas à anestesia epidural baixa, recebendo 3 ml de lidocaína a 2% sem vasoconstritor. Em seguida, o inovulador protegido por camisa sanitária foi introduzido na vagina do animal, procedendo a transposição cervical os embriões foram depositados no corno uterino ipsilateral ao corpo lúteo.

No delineamento experimental o lote (PRECISA INSERIR QUAL LOTE FOI ESSE: 1, 2 OU 3?) (tendo em vista que os lotes foram de fazendas diferentes) foi considerado bloco. O modelo foi analisado utilizando a estatística de Kruskal Wallis. As variáveis independentes (concentração de HDLc, concentração de P4, ECC e vacas e novilhas) foram correlacionadas entre si e com a variável resposta taxa de gestação. O valor de r das correlações e sua probabilidade foram obtidos pelo Proc. Cor. Concentrações de colesterol-HDL, P4 e ECC por taxa de prenhes DG N HDLc P4 ECC 0 51 58,7±15,7 5,6±3,8 3,2±0,4 1 37 53,0±13,0 6,5±2,9 3,2±0,3 0 = prenhez negativa 1= prenhez positiva Independente do lote houve correlação negativa entre HDLc e a categoria animal. Esse fato foi explicado pela baixa concentração (P<0,01) de HDLc analisado em novilhas em relação às vacas.

No entanto, a concentração de P4 foi semelhante (P<0,2) entre as categorias utilizadas. Adicionalmente as novilhas apresentaram uma média de condição corporal maior (P<0,02) que a das vacas. Contudo, a taxa de gestação não diferiu entre essas categorias animais (P<0,16) (Tabela 2). A concentração de progesterona interferiu na taxa de gestação, o que condiz o que foi dito por Mann e colaboradores (2006). Discussão O presente estudo mensurou níveis séricos de HDLc e P4 no momento do implante dos embriões em vacas receptoras e posterior correlação entre tais níveis e a taxa de prenhez da fêmea. Estudos mostraram que o aumento da concentração plasmática de colesterol-HDL (HDLc) pode contribuir no combate ao estresse oxidativo, aumentar a síntese de progesterona (P4) do corpo lúteo (CL) (Grummer Carrol, 1988), aumentar a síntese folicular ovariana (LUCY et al.

a), ter ação benéfica no eixo hipotalâmico-hipofisário-ovariano (LUCY et al. c; THOMAS e WILLIAMS, 1996). Conclusões O presente estudo permite evidenciar que os níveis plasmáticos de P4 condizem com as taxas de prenhes positivas de vacas e novilhas, apoiando a literatura citada na introdução deste trabalho. Já para o HDLc, o lote com os maiores níveis apresentou as menores taxas de gestação, o que sugere uma possível correlação negativa entre tais níveis e as concentrações de P4. Entretanto, a análise correlativa entre níveis de HDLc e P4 está fora do escopo deste trabalho. Suporte Financiamento Este trabalho teve apoio da Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais (FAPEMIG) e Biotran LTDA. Referências Bibliográficas Chebel, R.

Anderson, L. E. Wu, Y. L. et al. J. A review of lipoprotein cholesterol metabolism: Importance to ovarian function.  J. Anim. Sci. Sci. Mann, G. E. Fray, M. D. N. et al. Effects of treatment with human chorionic gonadotrophin or intravaginal progesterone-releasing device after AI on circulating progesterone concentrations in lactating dairy cows.  Reproduction, Fertility and Development, 25(5), 818-824. Santos JEP. A. et al. Treatment of cycling and noncycling lactating dairy cows with progesterone during Ovsynch.  Journal of dairy science, 89(7), 2567-2578. Thomas, M.