Manual de Microbiologia geral e clínica

BACTÉRIAS GRAM- POSITIVAS: tem parede constituída de muitas camadas de peptídeoglicano, formando uma estrutura rígida e espessa. Além de conter ácidos teicóicos que impedem a lise celular e favorecem o crescimento celular. BACTÉRIAS GRAM-NEGATIVAS: a parede é constituída por poucas camadas de peptídeoglicano e uma camada de membrana externa que consiste em liloproteínas e fosfolipídos, formando uma estrutura fina/delgada. Não contém ácido teicóico e estão mais suscetíveis ao rompimento mecânico. PAREDE CELULAR X COLORAÇÃO DE GRAM • O complexo cristal violeta-iodo se combina ao peptídeoglicano; • O descorante remove o lipídio da membrana externa das bactérias gram-negativas (ficam incolores); • A adição de fucsina torna as células rosa; MECANISMOS MICROBIANOS DE PATOGENICIDADE Cápsulas: aumenta a virulência da espécie, pois resiste às defesas do hospedeiro impedindo a fagocitose.

COCOS GRAM=POSITIVOS (Staphylococcos, Streptococcus e Enterococcus) STAPHYLOCOCCOS • São bactérias gram-positivas que habitam naturalmente pele e mucosa; • Anaeróbios facultativos; • Catalase positiva; • Identificação: pigmentação da colônia, por fator clumping(presença de bolhas), é resistente à novobiocina, faz fermentação em ágar manitol. S. aureus • Grande problema mundial, responsável por infecções relacionadas à assistência à saúde e comunitárias e resistente à maioria dos antibacterianos utilizados; • Habita microbiota da pele e mucosa; • Única espécie coagulase positiva em humanos; • MRSA( S. aureus resistente à Meticilina) -> meticilina é um antibiótico betalactâmico de pequeno espectro pertencente ao grupo das penicilinas. • Possuem cápsula que impede a fagocitose – inibindo a quimiotaxia; • Produz fibrinolisina – dissolve os coágulos facilitando a disseminação pelos tecidos; • Possuem receptores de membrana específicos – Proteína A (inibe a ação do IgA), ácidos teicóicos (faz ligação do patógeno às células epiteliais) e peptídeoglicano (inibe a fagocitose- promovendo proteção); STREPTOCOCCUS • Catalase negativa; • Possui padrões hemolíticos em ágar sangue; • Sensibilidade à antimicrobianos (bacitracina, optoquina, sulfametoxazol-trimetoprim); • Anaeróbios facultativos; • Produtores de hemolisinas (exotoxinas que provocam a lise do eritrócito) HEMÓLISE α-hemólise : caracterizada por hemólise parcial, associada à perda parcial de hemoglobina pelas hemácias, ocorrendo uma zona cinza-esverdeada no meio da cultura ao redor da colônia; ß -hemólise: caracterizada pela lise completa das hemácias que rodeiam a colônia, ocorrendo uma zona transparente (zona de lise total) ao redor da colônia.

O S. aureus resiste à alta salinidade do MSA, degrada o manitol em colônias amarelas 6. Teste de sensibilidade à Novobiocina: Fazer suspensão bacteriana em soro fisiológico e acertar turvação até a escala 0,5 de MacFarland. Com auxílio de um swab semear a suspensão em ágar Mueller-Hinton, formando um tapete homogêneo. Depositar um disco de papel impregnado de novobiocina, na superfície do ágar semeado. Considerar prova positiva quando ocorrer qualquer zona de inibição ao redor do disco. CAMP TEST Com agulha bacteriológica semear uma cepa de Staphylococcus aureus caninus formando uma linha reta em ágar sangue. Semear o organismo teste de forma perpendicular ao S. aureus caninus , formando uma estria de 2-3 cm de comprimento sem tocar na estria do estafilococo. Incubar por 18-24h, a 35-36ºC.

coli forma colônias vermelho escuro. As bactérias produtoras de ácidos fracos formam colônias rosa-pálido ou colônias que são claras na periferia e tem o centro rosado. IDENTIFICAÇÃO BIOQUÍMICA • A identificação bioquímica é baseada na presença ou não de diferentes enzimas codificadas pelo material genético dos cromossomos bacterianos. As provas são: • FERMENTAÇÃO DA GLICOSE: Água peptonada com indicador pH azul de bromotimol, acrescido de glicose na concentração de 1%. A fermentação da glicose é verificada pela viragem do indicador para a cor amarela, e a produção de gás pela formação de bolhas dentro do tubo. É utilizado um ágar nutriente inclinado, assepticamente semeia-se o microrganismo com auxílio da alça ou agulha de níquel cromo, fazendo estrias na superfície (ápice) do meio, como na figura.

SEMEADURA EM PICADA O objetivo desse tipo de semeadura é verificar a motilidade do microrganismo em ágar semissólido. Semeia-se o microrganismo com uma agulha de níquel cromo, fazendo uma picada no centro do meio de cultura penetrando até metade da sua altura, após período de incubação interpretar resultado: Bactéria móvel: crescimento por todo o meio de cultura; Bactéria imóvel: crescimento somente no local da picada SEMEADURA POR ESGOTAMENTO O objetivo dessa semeadura é obter colônias isoladas, permitindo distinguir os diferentes microrganismos. Semeia-se o material com o auxílio de uma alça níquel cromo, fazendo sequências de estrias na superfície do meio de cultura da placa de Petri. Inicie transferindo o material para o meio (esgotamento inicial). ÁGAR SALMONELLA-SHIGELLA Ágar SS possui componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de sódio) que inibem microrganismos gram-positivos.

A incorporação da lactose ao meio permite diferenciar se o microrganismo é lactose positiva (bactérias que fermentam a lactose produzem ácido que na presença do indicador vermelho neutro resultam na formação de colônias rosa), e bactérias que não fermentam a lactose que formam colônias transparentes. O tiossulfato de sódio e o citrato férrico permite a detecção de H2S evidenciado por formação de colônias de cor negra no centro. INTERPRETAÇÃO Cor original: vermelho alaranjado; Colônias com centro negro (H2S) ou colônias incolores: suspeita de Salmonella Colônias incolores: suspeita de Shigella. Colônias cor de rosa ou vermelhas: suspeita de E. Espécies de Klebsiella: colônias muito mucosas, cor variável de amarelo a branco azulado; Espécies de Proteus: colônias azul translúcidas, geralmente são menores que E.

coli. Espécie de Salmonella: colônias planas de cor azul; Enterococcus faecallis: colônias amarelas, com 0,5 mm de diâmetro; S. aureus: colônias amarelas de 0,75 mm de diâmetro. Staphylococcus coagulase negativa: colônias amarelo palha e brancas; Corynebacterium: colônias pequenas e cinza; Lactobacilos: colônias pequenas e de superfície rugosa; Pseudomonas aeruginosa: colônias verdes, com superfície prateada e periferia rugosa; CALDO BHI – brain heart infusion É um meio para cultivo de estreptococos, pneumococos, meningococos, enterobactérias, não fermentadores, leveduras e fungos. Proteus spp. Stenotrophomonas maltophilia, Cryseobacterium meningosepticum, Moraxella catarrhalis; DNAse negativo: Staphylococcus coagulase negativa, demais enterobactérias, demais bacilos gram-negativos não fermentadores. Cepas de alguns microrganismos produzem DNAse e endonuclease termoestável. Essas enzimas hidrolisam o DNA contido no meio de cultura após um período de incubação.

Posteriormente esse meio é acidificado com HCl 1N para a revelação da prova.