Matthew Peachey
Imunologia
3/4/02
Caixa de ferramentas # 5Imunoprecipitação e uso de anticorpos no isolamento de genes
Provavelmente, as descobertas mais úteis da nova tecnologia são a capacidade de isolar genes familiares individuais de um grande genoma completo de organismos e identificar esse gene. Existem várias estratégias disponíveis para atingir esse objetivo, muitas das quais utilizam anticorpos para reconhecer poções de moléculas. Para proteínas como proteínas da área celular, é bastante difícil limpar uma solução de proteína.
Para produzir anticorpos para esses tipos de aminoácidos, células cutâneas inteiras ou misturas celulares serão injetadas em coelhos e os anticorpos coletados posteriormente. No entanto, os anticorpos devem ser separados nos outros tipos nos soros. Para isso, táticas como a cromatografia em molde estão acostumadas a isolar os anticorpos dos soros. Anticorpos isolados podem ser colocados em uma solução de proteínas saudáveis, permitindo a ligação de proteínas específicas, levando à precipitação proveniente da solução.
Este tipo de reclusão de moléculas-alvo da solução que aplica anticorpos é chamado imunoprecipitação. As proteínas podem então ser removidas dos anticorpos e separadas utilizando técnicas de eletroforese em gel. Uma estratégia realmente comum frequentemente usada é referida como eletroforese em solução bidimensional. Um exemplo é executado em uma tira muito fina de poliacrilamida, depois colocada sob corrente perpendicular, movendo as proteínas da amostra primeiro em uma direção e depois isolando-as em outra.
Isso permite a separação de moléculas pelo tamanho, através de taxas diferentes de substâncias de halteres moleculares idênticos. Mais útil para os campos da bioquímica e genes herdados moleculares é o uso desses métodos na identificação de genes. Inicialmente, um gene deve ser separado de um organismo. Isso poderia ser feito aplicando enzimas digestivas de restrição, cortando o DNA em pedaços e depois inserindo esses tipos de pedaços em vetores plasmídicos, criando uma biblioteca de genética.
Esses tipos de vetores são então colocados em bactérias, que avançam na replicação da genética e na criação de seus produtos. Qualquer tipo de bactéria que produza a proteína de interesse necessária será isolada, usando anticorpos radiomarcados que se combinam especificamente com a proteína de ponto. O grupo bacteriano transfectado é lavado nesses anticorpos marcados. Os anticorpos restantes são então limpos à medida que os que utilizam uma proteína complementar necessária são mantidos na superfície.
As colônias são então simplesmente observadas, destinadas à marcação radioativa. Qualquer tipo de colônia demonstrando radioatividade possui um produto proteico capaz de se ligar ao anticorpo específico. Esses tipos de colônias podem ser removidos e isolados. Sua genética inserida em particular pode ser retirada e sequenciada, fornecendo o código genético do DNA responsável por determinadas proteínas de interesse.
Mais uma habilidade interessante dos anticorpos é toda a sua ação como agonistas e antagonistas. No momento em que o anticorpo é produzido para uma proteína funcional, o anticorpo pode ser capaz de imitar a ação da molécula de ligação pretendida. Quando isso ocorre, o receptor é ativado em resposta ao anticorpo. Esse estômago é referido como agonista.
No entanto, também é possível que o anticorpo possa se ligar a um receptor e inibir a ação. Estes são anticorpos antagônicos. Como pode ser observado, há muitos usos para anticorpos em diversas áreas diferentes de pesquisa, cada uma oferecendo uma gama única de possibilidades interessantes para o futuro.
Fontes:
http: / /www.dps.ufl.edu/hansen/protocols/imp98.prt.htm
http://www.protocol-online.net/molbio/Protein/immuno_precip.htm
http://pingu.salk.edu/~sefton/Hyper_protocols/immunoprecip.html
